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產品分類
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色譜柱的特點和分類
  • 發布日期:2009-10-16      瀏覽次數:3774
    • 3-1 柱的結構
        1、堵棒(或導管)2、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過濾片
         3-2 柱的分類:
      根據所有的擔體材料分為三種:
        a.硅膠型:機械強度高,易制成小顆粒,理論塔板數高。
        b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內穩定
        c.羥基磷灰石型:對蛋白質等生物高分子樣品有特殊的選擇性。
      根據分離方式分類:
        a.硅膠型
         1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、維生素E,CN--甾類激素。
         2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。
         3) 離子交換:
           WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質
           WCX(弱酸陽離子交換)--蛋白質
           SAX(強堿陰離子交換)--核苷酸
           SCX(強酸陽離子交換)--兒茶酚膠
         4)凝膠過濾:
           Diol--蛋白質 GF--蛋白質
        b.聚合物型:
         1)反相:ODP--50--肽,蛋白質,低分化合物。
         2)離子交換:ISC--氨基酸,胍類化合物,ISA--糖,IC--無機離子,PA--蛋白質,ES--蛋白質。
         3)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。
         4)離子排阻:SCR-101H 102H--有機酸
         5)凝膠過濾:ION--多糖 GS--水溶性分子
         6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子、橡膠。
         7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質、核苷酸
      按尺寸分類:
        1.制備:30mm 50mm 內徑,半制備:20mm內徑。
        2.分析:標準型柱:4_8mm內徑。
            快速色譜柱:3mm內徑、5cm長、4.6mm內徑。
            小孔徑柱:2.5mm內徑,微孔徑柱1mm內徑。
      3-3柱的技術指標
        *耐壓:不小于40Mpa。
        *滲透性:反相--流動相甲醇1ml/min,壓力3Mpa。
             正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
        *柱效:理論塔板極數>3x103。
        *對稱柱:葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內。
        *外觀:光潔、標牌、尺寸、填充劑、流動相方向、日期等。
      ODS柱
        ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔體的表面,然后填充的柱,在HPLC中應用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,其中極大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內徑4.6mm,長度150mm。
      一般反相色譜系統,流動相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈,非極性固定相,如十八烷基。反相系統簡單,重復性好,柱子能長期穩 定工作,能完成分離、分析任務的60-80%,所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
      柱的使用和維護
        由于柱的質量直接影響到樣品組分得分離情況,組分的定性,定量分析,所以在操作時必須十分注意。
        通常柱子損壞表現為:柱壓升高,柱效下降,保留值改變,峰形崎變等。
      以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事項:
        * 勿使柱子受較強振動
        * 較長時間不用時,應在柱中充滿甲醇,并把兩頭封死,盡量不使干枯。
        * 當用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時,工作結束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時,使柱子處于甲醇中,因水   易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。
        * 當使用KH2PO4等緩沖液時,鹽的濃度宜低,否則鹽容易析出,柱效降低,柱壓升高,使用后   必須用水沖洗( 絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,然后再用甲醇沖洗。
        * 硅基固定相不宜在PH>8時使用,此時容易產生絮狀物析出,堵塞柱子。
        * 當流動相呈酸性時,使用后必須用水沖洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗。
        * 流動相經過過濾處理。
        * 樣品也經過過濾處理。
        * 樣品有時能復蓋填料得活性點,使柱壓升高,保留時間下降,防止方法是樣品經過過濾。
        * 樣品組分的不可逆吸附,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質、糖)防止方法是加保護柱和溶劑反沖,   zui常用的是四氫呋喃。
        * 當流動相從A換到B時,A、B不相溶,必須選擇一能同A、B互溶劑C,先換成C再把C換成B,zui常用的中間液是異丙醇。
        * 由于長期使用,在較大的壓力下,擔體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸變。維護方法:卸下   接頭,用甲醇把填料調成糊狀,填入柱內,同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次。 
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